|
贊助商鏈接 |
苗木組織培養(yǎng)中各種用于接種培養(yǎng)的材料 稱為外植體。包括苗木體的各種器官、組織、細 胞和原生質體等。組織培養(yǎng)所用的材料非常廣 泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時 也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般 很少采用。
對于木本花卉來說，闊葉樹可在一二年生的
枝條上采集，針葉樹種多采種子內的子葉或胚
軸.草本苗木多采集莖尖。
在快速繁殖中，最常用的培養(yǎng)材料是莖尖， 通常切塊在0. 5 001左右，如果為培養(yǎng)無病毒苗 而采用的培養(yǎng)材料通常僅取莖尖的分生組織部 分，其長度在0.111皿以下。
培養(yǎng)材料的滅菌
取來的材料雖經選擇，外部總還有不少雜 菌，因此,接種前應進行表面滅菌。
①先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用 蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或吸水紙將材料上的 水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。
②在無菌環(huán)境中將材料放人70《酒精中浸 泡30〜60 So
③再將材料移人漂白粉的飽和液或0.01% 升汞水中消莓5〜10 min.
④取出后用無菌水沖洗三四次。
將已滅菡的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無
菌的環(huán)境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮 胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2〜
5 0巾厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴 禁用手觸動材料。
4. 4. 2 接種
接種是指把經過表面滅菌后的苗木材料切 碎或分離出器官、組織、細胞，轉放到無菌培養(yǎng) 基上的全部操作過程。整個過程均須無菌 操作。
①接種前先把接種室紫外燈打開，照射滅 菌20〜30 !^⑴或提前0. 5〜1 d用髙錳酸鉀和 甲醛混合液熏蒸。接種臺要提前開啟。
②操作人員進人接種室前需用肥皂水洗手 滅菌，換上經過消毒滅菌的白色工作服和拖鞋， 戴上工作帽和口罩。
③進人接種室后用70《的酒精棉球擦拭雙 手、超凈工作臺和需放上工作.臺的所有器具，防 止交叉污染。‘
④點燃酒精燈，將接種鉤、剪刀、鑷子放人 不銹鋼盤或瓷盤內燒灼，冷卻后備用。接種鉤、 剪刀、鑷子等不使用時浸泡在95‘冗的酒精中,用 時在火焰上滅菌，待冷卻后使用。每次使用前均 需進行用具滅菌。
⑤將外植體放入經燒灼滅菌的不銹鋼盤或 瓷盤內處理。如外植體為莖段的，將莖段上的葉 柄和莖的上下端剪掉一小節(jié);培養(yǎng)脫毒苗的，在 雙筒解剖鏡下剝離切取大小0. 2〜0.‘3 mm時莖 尖分生組織。
⑥燒灼瓶口和塞子，將培養(yǎng)瓶傾斜拿穩(wěn)，打 開塞子，用鑷子將接種材料送人瓶內，用接種鉤 將材料壓人培養(yǎng)基中，燒灼瓶口和塞子,并上塞。 此過程中要注意避免細菌污染。-
4. 4. 3 培養(yǎng)
初代培養(yǎng)
將從苗木體上分離下來的部分進行第一次 培養(yǎng)，稱初代培養(yǎng)，也稱誘導培養(yǎng)。培養(yǎng)基由于 苗木種類的不同而不同，通常是?^5基本培養(yǎng)基 加人適量的苗木生長調節(jié)劑及其他成分。首先 在251下進行暗培養(yǎng),待長出愈傷組織后轉入 光培養(yǎng)。此階段主要誘導芽體解除休眠，恢復 生長。
增殖培養(yǎng)
也稱繼代培養(yǎng)。外植體的增殖是組培的關 鍵階段,在新梢等形成后為了擴大繁殖系數(shù)，需 要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉人增殖培養(yǎng) 基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改 良，以利于增殖率的提高。增殖一個月左右后， 可視情況進行再增殖。為了防止變異或突變，通 常只繼代培養(yǎng)10〜12次。根據需要，一部分進 行生根培養(yǎng)，一部分仍繼代培養(yǎng)，陸續(xù)供用。
繼代培養(yǎng)的接種過程與初代培養(yǎng)有兩點不
生根培養(yǎng)
.繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側芽等一般沒有 根，必須轉到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng) 基通常為1/2朋5培養(yǎng)基加人適量的苗木生長調 節(jié)劑。切取增殖培養(yǎng)瓶中的無根苗，接種到生根 培養(yǎng)基上進行誘根培養(yǎng)，一個月后即可獲得健壯 根系。有些易生根的苗木在繼代培養(yǎng)中通常會
添加到百度搜藏
